细胞培养基的选择与配制
人肝胆管类器官培养基（分化）是一种化学定义的
细胞培养基，用于建立和培养从成体干细胞衍生的人肝胆管类器官。肝胆管的自我更新上皮细胞是由位于肝脏的干细胞及其祖细胞的增殖所驱动的。肝胆管类器官因其上皮在结构、细胞类型组成和自我更新动力学方面的表现，而具有真实器官的特征。肝胆管类器官可以在分化培养基中诱导出肝样细胞，为人类肝脏发育和疾病的研究提供了模型。
细胞培养基的选择与配制
选择依据：根据细胞类型和实验目的挑选培养基。贴壁生长的癌细胞系常用RPMI-1640，原代细胞或对营养要求高的细胞常选DMEM，必要时需补充血清、生长因子等。
配制要点：
严格按说明书操作，精确称量各成分，避免局部浓度过高对细胞造成损害。
溶解与pH调节：用超纯水充分搅拌溶解。配制液体培养基时，pH通常需调至7.2–7.4，与生理环境接近。干粉培养基在调节pH前可能呈浑浊状态，属正常现象。
过滤除菌：配制完成后，使用0.22μm滤膜过滤，确保无菌。
补充：部分商品化液体培养基不含，使用前需无菌添加；干粉培养基通常已预添加。
储存与稳定性管理
基础培养基：
液体基础培养基一般2–8℃避光保存，禁止冷冻（冷冻可能导致盐类析出，融化后无法复溶，改变渗透压）。
液体培养基建议3个月内使用，干粉培养基配制后12个月内使用。
培养基（添加了血清、添加剂）：
配好后4℃避光保存，有效期通常仅3–4周，因添加剂中的重组蛋白易降解。
建议每次配制50–100mL，避免长期存放导致效果下降。
血清与添加剂：
胎牛血清（FBS）、双抗、生长添加剂等通常-20℃保存，使用前移至4℃缓慢溶解，解冻后应分装，避免反复冻融。
无血清添加剂融化后，建议分装成小支置于-20℃，避免反复冻融导致蛋白变性。
解冻与复温
冷冻培养基：推荐在2–8℃温和溶解，不可在≥37℃环境中解冻，以免损害热敏感成分。解冻后应立即使用。
冷藏培养基：从冰箱取出后，需置于室温自然复温，严禁将低温冷培养基直接加入细胞培养体系，温差会剧烈刺激细胞，导致活性下降、贴壁失败。
添加剂与补充成分的使用
血清：添加比例需根据细胞类型确定（常见5%–10%），不同批次的血清可能存在差异，可能影响细胞生长，建议先进行批次测试。
生长因子/添加剂：多为100×或50×浓缩液，使用前按比例用基础培养基稀释。所有操作均需在无菌条件下进行。
渗透压：添加补充剂可能改变培养基的最终渗透压，对渗透压敏感的细胞系需在使用前重新检查。
无菌操作规范
环境准备：超净工作台或生物安全柜使用前紫外消毒至少30分钟，操作台面用75%乙醇擦拭。
个人防护：穿戴无菌衣帽、手套，操作时避免说话、咳嗽，防止微生物污染。
器材无菌：所有移液管、吸头、容器等均需高压灭菌或使用无菌商品化耗材。
操作连贯：从吸取培养基到接种细胞，动作轻柔连贯，减少暴露时间。
使用过程中的检查与判断
使用前观察：正常培养基应为清亮、桃红色。若出现颜色发黄、液体浑浊、絮状沉淀，提示可能污染或营养耗尽，禁止使用。
pH变化：含酚红的培养基变黄（酸性）通常与污染或细胞状态不良有关；变紫（碱性）可尝试通入无菌CO₂调整，但长时间未用的碱性培养基不建议继续使用。
换液频率：根据细胞生长情况定期更换新鲜培养基，维持营养供应和良好环境。
