豚鼠脏器组织白
细胞分离液试剂盒产品说明
【产品概述】
本试剂盒专为分离豚鼠脏器组织白细胞设计，同时也适用于从动物抗凝血液中分离白细胞。在无菌条件下分离得到的白细胞活性良好，可广泛应用于分子生物学研究及细胞培养等科研实验。（注：本品仅供科研使用，不可用于临床医疗。）
【产品组成】
为方便广大用户使用，本试剂盒包含以下核心组分及赠品。各单品也可根据货号单独购买，客户可根据实际实验需求灵活选择：
A.各种动物外周血白细胞分离液（详见附录，规格：2×100ml）
B.红细胞裂解液（赠品）（产品编号：NH4CL2009，规格：100ml）
C.全血及组织稀释液（赠品）（产品编号：2010C1119，规格：100ml）
D.细胞洗涤液（赠品）（产品编号：2010X1118，规格：100ml）
【检验原理】
本分离液是由FICOLL、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺配制而成的混合液。其工作原理如下：
抗凝血液加入分离液后，在离心力的作用下会发生分层。在FICOLL和羟乙基淀粉的作用下，红细胞与粒细胞会迅速聚集并沉降；此时，白细胞仍保留在分离液的上层及界面层。后续可通过红细胞裂解液去除残留的红细胞污染，大部分血小板则可在细胞清洗的低速离心过程中被去除。
注：针对不同种属及不同比重的细胞，因细胞离散系数及带电情况不同，如需定制特定比重或特定动物种属的分离液，需提供详细参数。
【仪器及耗材】
实验需自备以下基础设备（本试剂盒不提供）：
可提供400g离心力的水平转子离心机
15ml玻璃离心管
吸管及其他常规实验耗材
【注意事项与操作指南】
为确保最佳的细胞得率与活性，请务必严格遵守以下操作规范：
1.温度与时效控制：使用前，请将分离液复温至18-22℃。为保证细胞活性，建议在采血后2小时内进行实验；若需进行细胞计数，血液贮藏时间不得超过10小时，否则会导致细胞激活，降低得率。
2.液体选择：稀释血液或洗涤细胞时，严禁使用含钙（Ca）、镁（Mg）离子的缓冲液及培养液，以免引起血细胞凝集。推荐使用本公司提供的无Ca、Mg离子且低内毒素的全血及组织稀释液（2010C1119）和细胞洗涤液。
3.抗凝剂选择：抗凝剂为EDTA、枸橼酸或肝素。使用其他抗凝剂可能会影响细胞活性，且在血液稀释过程中应注意扣除抗凝剂的体积。
4.血液稀释技巧：当血液样本粘度过高或体积≥3ml时，稀释方法为：将血液在18-22℃下以250g离心10分钟，弃去血浆，然后补充1.5-2倍于弃去血浆体积的全血及组织稀释液，混匀备用。不当的稀释会严重影响细胞得率。
5.避免细胞激活：实验操作全程不可使用含粉手套，不可使用内毒素含量过高的液体，因为粉末颗粒及高内毒素均会激活细胞。
6.耗材材质要求：严禁使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，其产生的静电会导致细胞贴壁，从而影响分离效果。
7.吸取技巧：吸取白细胞层时需精准操作。吸取过多分离液层会导致交界处粒细胞混杂；吸取过多上层溶液则会导致血浆蛋白及血小板混杂。
8.纯度与活性优化：
如需进一步去除混杂的血小板，可在分离液上层添加4-20%的蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。
细胞纯度可在上述步骤后通过瑞氏染色法确定，细胞活性可通过台盼蓝染色法进行观察。
