大鼠肝S9是含细胞色素P450酶系的肝匀浆上清组分，常用于药物代谢、遗传毒性等体外试验，制备全程需低温无菌操作，保障酶活性。
一、材料准备
选用SPF级雄性SD大鼠（200-250g），实验前禁食12h、自由饮水。试剂：0.15MKCl匀浆缓冲液（pH7.4，含1mMEDTA、10μMPMSF、1μg/ml现配现用）、75%酒精、生理盐水。器材：高速冷冻离心机、玻璃匀浆器、无菌离心管、超净工作台、冰浴装置、-80℃超低温冰箱。
二、动物诱导（可选，提升酶活）
80mg/kg腹腔注射，连续3天，第4天取样；或联合β-萘黄酮（80mg/kg，第3天注射），同步诱导P450与P448酶系。
三、肝脏取材
麻醉大鼠，75%酒精消毒腹部，无菌剖开腹腔，快速摘取肝脏，立即置于冰浴缓冲液中，剔除结缔组织、淤血，用预冷缓冲液反复淋洗，去除残留血液。
四、组织匀浆
按肝脏重量：缓冲液体积=1:4（w/v）加入冰冷缓冲液，冰浴下用玻璃匀浆器手动匀浆10-15次，力度轻柔避免起泡升温，至匀浆液呈淡粉色均一状态。
五、差速离心
将匀浆液转移至无菌离心管，4℃、9000×g离心20min，离心后立即吸取上层清亮上清液，即为大鼠肝S9，避免吸到下层沉淀。
六、分装与保存
用无菌移液器将S9分装至冻存管，每管1-2mL，液氮快速速冻后，置于-80℃超低温冰箱保存，有效期不超过1年，避免反复冻融。
七、质量控制
用BCA法测定蛋白浓度，CYP450酶活检测验证活性，合格S9蛋白浓度通常为20-40mg/mL，酶活性符合试验要求。
