GST标签蛋白的作用是怎么样的
GST标签蛋白是一种广泛应用的融合标签，通过将GST基因与目标蛋白基因融合表达，赋予重组蛋白多种实用功能。以下是GST标签蛋白的核心作用：
一、促进蛋白表达与溶解性提升
分子伴侣效应
GST作为分子伴侣，可协助目标蛋白正确折叠，减少包涵体形成（不溶性蛋白聚集）。
应用场景：表达难溶蛋白（如膜蛋白、毒性蛋白）时，GST标签能显著提高可溶性表达水平。
案例：在表达人类β-肾上腺素受体时，GST标签使可溶性蛋白产量提升3-5倍。
稳定蛋白结构
GST的二聚体结构可保护目标蛋白免受蛋白酶降解，延长其半衰期。
优势：适用于需要长时间体外孵育的实验（如酶活性测定、药物筛选）。
二、高效纯化：基于亲和层析的分离
（GSH）亲和层析
GST标签能与固定化（GSH）特异性结合，实现一步纯化。
操作流程：
细胞裂解液上样至GSH-Sepharose柱；
用PBS洗涤去除杂蛋白；
用还原型（GSH）洗脱目标蛋白。
纯度：通常可达80%-95%，减少传统方法（如离子交换层析）的步骤。
高结合容量
GSH-Sepharose柱对GST标签蛋白的结合容量可达5-10mg/mL凝胶，适合大规模纯化。
对比：His标签纯化需优化金属离子浓度，而GST标签纯化条件更温和。
