与传统的MTT法相比CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒具有明显的优势:
1.MTT法生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而CCK-8(CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒)产生的甲臜是水溶性的,省去了溶解步骤,因此减少了该操作步骤带来的实验误差。
2.由于CCK-8产生的甲臜是水溶性的,无需吸掉培养基后,再用DMSO等有机溶剂溶解,非常适合用于悬浮细胞的活性测定。
3.与MTT方法相比,CCK-8法线性范围更宽,灵敏度更高。
4.CCK-8法对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。
5.CCK-8法无需配制,即开即用。
6.CCK-8法适合大规模、高通量的样品检测。
1.在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下)。
2.向培养板加入10μL的待测药物进行处理。
3.根据实验需要,将培养板在培养箱孵育一段时间(例如:6,12,24或48小时)。
注:如果不进行药物处理而直接测定细胞的活性,则不需要2-3步骤,直接从第4步操作。
4.向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D值的读数)。
5.将培养板在培养箱内孵育2-4小时。
6.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7.如果暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL 1%SDS(w/v)溶液或者0.1 M HCl溶液,并盖上培养板盖子,在室温条件下避光保存。24小时内吸光度不会发生变化。