显微计数法不溶微粒检测怎么用
显微计数法（药典 0903 第二法，仲裁法）完整使用操作
一、适用范围
光阻法结果不合格、药液有色 / 高黏度 / 乳剂 / 易起泡样品，以本法结果为最终判定依据国家药典委...。
二、仪器耗材与前期准备
1. 环境要求
全程在A 级层流净化台（百级）操作，全程防外来粉尘、纤维污染。
2. 器材
- 显微镜：100× 总放大（10× 目镜 + 10× 物镜），带校准后目镜测微尺；斜射光源，可清晰分辨滤膜网
- 真空抽滤装置：全玻璃 / 不锈钢滤器，25mm 滤膜配套
- 滤膜：白色网格混合纤维素膜，0.45μm 孔径、φ25mm
- 耗材：平头无齿镊子、洁净平皿、微粒检查用水、甘油（少量）
3. 试剂预处理（关键空白控制）
微粒检查用水预先经 0.45μm 滤膜反复过滤；取 50mL 水过滤空白膜，膜上≥10μm 微粒≤20 粒、≥25μm≤5 粒，否则水不合格重处理。 4. 滤器 / 滤膜预处理
- 平头镊子夹取滤膜放入滤器托架，固定；
- 滤器倒置，微粒水反复冲洗内壁，沥干；
- 安装抽滤瓶，分次加 5mL 微粒水抽滤 3 次，弃滤液，空白滤膜镜检无大量杂质方可使用。
三、样品过滤富集（分 3 类样品）
类型 1：标示装量≥25mL 注射液（取至少 3 份样品）
- 容器外壁冲洗干净，层流台内缓慢翻转 20 次混匀，快速开盖；
- 精密量取25mL 药液，沿滤器内壁缓慢倒入（防气泡冲击滤膜），静置 1min；
- 缓慢减压抽滤至滤膜近干，不可全抽干开裂；
- 再加 25mL 微粒水沿壁冲洗滤器，再次抽滤至近干（洗去药液基质干扰）；
- 镊子平稳取出滤膜，放洁净平皿；滤膜褶皱可薄涂一层甘油展平；微开盖自然晾干，盖好备用国家药典委...。
类型 2：标示装量＜25mL 注射液
取整瓶全部药液过滤，滤膜用 φ13mm，其余抽滤、洗涤、干燥步骤同上。
类型 3：注射用无菌粉末
按药典方法定量复溶，混匀后取规定体积滤液，同上述过滤流程。
四、显微镜计数操作
- 平皿放载物台，调光源、焦距至滤膜网格、测微尺刻度清晰；
- 移动载物台坐标轴，逐格扫描整张有效滤膜面积；
- 目镜测微尺判定粒径：分别统计最长粒径≥10μm、≥25μm固体微粒；
- 区分干扰物：纤维、滤膜破损点、气泡、结晶碎屑不计入微粒；
- 同法测剩余 2 份样品，记录每一份膜上两种粒径微粒总数。
五、结果计算与判定
- 取 3 份样品微粒数平均值，换算为每容器微粒数量；
- 药典标准（静脉注射液，单容器上限）：
- ≥10μm：≤3000 粒
- ≥25μm：≤300 粒
- 平均值超上限即判定不合格；显微法为仲裁，无需复测光阻法。
- 全程防污染：镊子、滤器、平皿只能用微粒水冲洗，禁止手触碰滤膜过滤面；操作时少说话、不扬尘。
- 控气泡：加液缓慢、抽滤负压不宜过大，气泡会遮挡微粒、造成漏数。
- 滤膜干燥适度：未干透药液残留易析出结晶；干透开裂会丢失微粒。
- 测微尺定期校准：每月用标准微球校正刻度，保证 10/25μm 判读准确。
- 样品混匀规范：翻转 20 次，禁止剧烈摇晃产生大量气泡。
- 高黏度样品：用经滤过的适宜溶剂定量稀释，同步做溶剂空白对照。
七、简易流程速记
环境净化→耗材水洗空白合格→样品混匀取样→缓慢抽滤 + 水洗滤膜→滤膜晾干→显微镜 100 倍全膜扫描计数→取均值对照药典判定。
