TLX DNA-seq Kit建库试剂盒包含了

　　TLX DNA-seq Kit建库试剂盒

　　连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up)

　　A.产物纯化操作步骤(必选)

　　1、准备工作：将 AMPure XP Beads 室温平衡 30 min。配制 80% 乙醇。

　　2、吸取 48 μL AMPure XP Beads   (1 .2×，Beads:DNA=1.2:1)  至接头连接产物中，  涡旋混 匀或移液器吹打 10 次混匀，室温孵育 5 min。

　　3、短暂离心并置于磁力架上，待溶液澄清后(约 5 min)，弃上清。

　　4、保持 PCR 管始终置于磁力架中，加入 200 μL 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，弃上清。

　　5、重复步骤 4。

　　6、保持 PCR 管始终置于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚出现龟裂(约 5 min)*。

　　7、

　　1)如产物无需进行片段分选，将 PCR 管从磁力架中取出，磁珠 ( 无需用水洗脱 ) 直接用于文库扩增步骤反应。

　　2)如产物需进行双轮分选，加入 52-102 μL Nuclease-free Water，涡旋振荡或轻轻吹打至充分混匀，室温静置 5 min。将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清 后(约 5 min)  ，小心移取 50-100 μL 上清至新 PCR 管中，切勿触碰磁珠(洗脱体积越大，洗脱效率越高，分选效果越好，详细说明见注意事项）。

　　3)等待磁珠干燥过程中，可配制 文库扩增步骤反应体系。

　　B.双轮分选操作步骤(可选)

　　1、准备工作：将 AMPure XP Beads 室温平衡 30 min。配制 80% 乙醇。

　　2、根据 DNA 片段长度要求，参考表 4 向纯化产物中加入**轮分选磁珠，涡旋混匀或移液 器吹打 10 次混匀。

　　表 3. 接头连接反应体系(接头详细说明见注意事项

　　【注】：表中“0.7×”表示样品 DNA 体积的 0.7 倍。如文库插入片段长度为 200 bp，样品 DNA 体积为 100 μL，则**轮分选磁珠使用体积为 0.70×100 μL=70 μL；第二轮分选磁珠使用体积为 0.25×100 μL=25 μL。

　　3、室温孵育 5min。将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后(约 5 min)  ，小 心转移上清到干净的 PCR 管中。

　　4、参考表 4 向上清中加入第二轮分选磁珠。涡旋混匀或移液器吹打 10 次混匀，室温静置 5 min。

　　5、 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后(约 5 min)，弃上清。

　　6、保持 PCR 管始终处于磁力架中，加入 200 μL 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec，弃上清。

　　7、重复步骤 6。

　　8、保持 PCR 管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚出现龟裂(约 5 min)*。

　　9、将 PCR 管从磁力架中取出，磁珠 ( 无需用水洗脱 ) 直接用于文库扩增实验。

　　* 等待磁珠干燥过程中，可配制 文库扩增步骤反应体系。