接种工具与试管菌种的接种操作

（一）接种工具

常用的接种工具有接种针、接种钩和接种环。对针、钩和环的要求是能在火焰上烧灼时很易烧红，而离开火焰后又能很快地冷却。用白金丝，但价格昂贵，现在都用电炉丝代替。接种环的内径约2mm，环面应平坦

（二）接种准备工作

如果在接种室操作，接种室应经常打扫，用煤酚皂液擦洗桌面及墙壁，用甲醛熏蒸。接种前应打开无菌室紫外灯灭菌半小时。接种操作人员进入接种室前，应先做好个人卫生工作，换工作鞋，穿无菌工作衣，戴口罩（工作衣、口罩、工作鞋只准在接种室内使用，不准穿着到其他地方去，并定期换洗和消毒灭菌）；在超净工作台上进行（般适用于斜面试管、三角瓶种子的接种），先用75%的酒精溶液擦净工作台面，开启超净工作台10min后即可接种。对接种的试管、角瓶等应做好标记，注明菌种名称，接种日期或培养基名称等。

（三）试管菌种的接种操作

试管菌种的接种是将试管原菌在无菌的条件下移接至另试管培养基上。试管接种中原菌的纯粹与否，是生产实践中的一个极重要的关键，因此必须掌握好试管菌种的接种技术。进行接种时，手用肥皂洗浄，再用75%酒精擦手，或新洁尔灭溶液消毒。

扩大移接三角瓶固体培养基、三角瓶液体培养基或试管液体培养基等，接种原理相同，操作方法也基本一致。接种操作简单，多练习几遍即能掌握。接种工作非常关键，因为污染杂菌，多发生在这个过程。

六、菌种的保藏

（1）斜面菌种保藏法将已长好的斜面菌种，置于4℃C左右的冰箱中保藏。一般可保存2~3个月，长则半年。每隔一定时间进行移接培养菌种。

（2）矿油保藏法适用于嫌气性细菌，不适宜于酵母菌，更不适宜霉菌。将已灭菌的液体石蜡，在无菌操作下，注入已长好的斜面菌种试管里，油层高于菌种斜面1cm。最后密封管口，置于室温或冰箱内保藏，保藏时间为1~2年。

（3）沙土管保藏法将沙子用水洗净，烘干，过60目筛。另外采净土（距地面33cm以下），晒千，磨细，用120目筛子过筛。以60%沙与40%土相混，每小试管装上述混合士1g。充分灭菌后，每管加孢子悬浮液几滴。封口前放于干燥器内真空干燥。

（4）冷冻保藏法在这类保藏中，几乎利用了一切有利于保藏的因素，故是目前一类综合性保藏方法。保藏时间为5~15年，适合于各大类菌种保藏