生产车间阶段种子制备流程

实验室制备的孢子或摇瓶菌丝体移到种子罐进行扩大培养，对于不同的菌种，种子罐培养基虽各有不同，但配制原则是基本相同的。

好氧种子进罐培养时需要供给足够的无菌空气并不断搅拌，使每部分菌丝体在培养过程中获得相同的培养条件，均匀地获得溶解氧。孢子悬浮液般采用微孔接种法接种。摇瓶菌丝体种子可采用火焰接种或压差法接种。种子罐之间或发酵罐之间的移种主要采用压差法，由种子接种管道进行移种，操作过程中要防止接受罐的表压降到零，否则会染菌。

生产车间制备种子时应考虑三点：种子罐数、种龄、接种种子罐数是制备种子需逐扩大培养的次数。种子罐数通常是根据菌种生长特性、孢子发芽速率、菌体繁殖速率以及发酵的容积而设定的。对于生长较慢的链霉菌，般采用三发酸（二种子罐扩大培养）、四发酵（三种子罐扩大培养）。对于生长快的细菌，种子用量比较少，接种的数相应也少，般采用二发酵（扩大培养）。种子罐的数少有利于简化工艺，并可减少由于多次移种而产生的染菌几率。在实际生产中，应该考虑尽量延长发酵时间（如生产产物的时间），缩短由于种子发芽、生长而占用的时间，以提高发酵生产效率，从而降低生产成本。

种龄是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下种子罐或发酵罐时的培养时间。在种子罐中，随着培养时间的延长，菌丝量增加，营养基质逐渐消耗，代谢产物不断积累，导致后菌丝量不再增加而逐渐趋于老化，因此选择适当的种龄显得十分重要。通常种龄以菌丝处于生命力为旺盛的对数生长期，培养液中菌体量还未达到时为宜。若过于年轻的种子接入发酵罐，往往会出现前期生长缓慢，整个发酵周期延长，产物开始形成的时间推迟，甚至会因菌丝量过少而在发酵罐内结球，造成发酵异常的情况。

接种量是指移入的种子液体积与接种后培养液总体积的比例。接种量的大小取决于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速率和产品生产的工艺要求。较适宜的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖到达的时间，使其在生产中迅速占据整个培养环境，减少杂菌生长机会，同时也缩短了产品生成时间。相反，接种量过多，使菌丝生长过快，培养液黏度增加，造成溶解氧不足而影响产物的合成。总之，对每个生产菌种，要进行多次试验后才能决定适接种量。