• 取新鲜组织，剔除血管、脂肪、结缔组织等与研究无关的干扰组织；

• 用生理盐水或PBS清洗和污染物，用无尘吸水纸吸去表面液体；

• 将切成边长 0.5 cm 小块或 100 mg 左右小块；

• 将组织块用液氮速冻5 min以上，并于-80℃保存。

脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤等常规动物组织，定量蛋白质组推荐送样量＞200 mg；修饰蛋白质组推荐送样量＞500 mg。

• 地上部分在样本离体前用无菌水清洗杂质，水干后采集样本；地下部分在样本离体后，用预冷的PBS清洗杂质，无尘纸吸干后采集样本；

• 去除非目标组织及衰老、霉变等干扰部分；

• 样品剪切成小块，锡纸包裹或放入冻存管中；

• 将组织块液氮速冻5 min以上，并于-80℃保存。

幼嫩的根、叶、花、愈伤组织等常规植物组织，定量蛋白质组推荐送样量＞1g；修饰蛋白质组推荐送样量＞2 g。

血浆样本

• 使用EDTA抗凝剂和蛋白酶抑制剂的采集血液；

• 轻轻地上下颠倒混匀 8-10 次；

• 立即4℃，1600 g离心 10 min；

• 用移液器将血浆转移到离心管中，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心。

血清样本

• 使用真空收集血液；

• 轻轻地上下颠倒混匀5-6 次；

• 4℃，静置15-30 min；

• 4℃，1600 g离心10 min；

• 用移液器将上层淡黄色血清转移到离心管中，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心。

血浆/血清样本，定量蛋白质组推荐送样量＞500 ul。

悬浮细胞

• 细胞培养至2-5×10⁵/ml，收集到15 ml离心管中，4℃，400 g-1000 g离心5-10 min，去上清；

• 收集的细胞用10 ml PBS洗3次；

• 1 ml PBS重悬细胞后转移到新的1.5 ml离心管；

• 再次用上述条件离心，尽可能将上清去除干净；

• 用适量PBS重悬，液氮速冻，并于-80℃保存

贴壁细胞

• 细胞培养至覆盖度70-90%；

• 去培养基，培养皿用10 ml PBS洗3次，培养皿倒扣，将液体控干；

• 培养皿置于冰上，消化后，加入PBS悬浮细胞；

• 收集到15 ml离心管中，4℃，400 g-1000 g离心5-10 min，去PBS；

• 1 ml PBS重悬细胞后转移到新的1.5 ml离心管；

• 再次用上述条件离心，尽可能将上清去除干净；

• 用适量PBS重悬，液氮速冻，并于-80℃保存。

悬浮/贴壁细胞，定量蛋白质组推荐送样量＞1×10⁷个细胞或体积＞50ul细胞沉淀；

磷酸化蛋白质组推荐送样量＞5×10⁷个细胞或体积＞200ul细胞沉淀；

乙酰化、泛素化蛋白质组＞1×10⁸个细胞或体积＞500ul细胞沉淀。

• 离心法或其他方法分离菌和培养基；

• 收集菌体到15 ml离心管，用10 ml PBS洗3次；

• 用1 ml PBS 重悬菌体，转移到1.5 ml离心管中离心，用枪头吸去上清，记录菌的湿重或体积；

• 用适量PBS重悬，每管100 ul分装，液氮速冻，并于-80℃保存。

微生物菌体，定量蛋白质组推荐送样量湿重＞100mg或体积＞100ul；修饰蛋白质组推荐送样量湿重＞300mg或体积＞300ul。

胶点胶条

胶点/胶条或者泳道皆可，推荐考马斯亮蓝染色，要求条带清晰，无降解。

IP / Co-IP / Pull-down样本

蛋白洗脱液要求蛋白总量＞5ug，蛋白溶液进行SDS－PAGE电泳，下方两种电泳方式任选其一即可。

• 蛋白洗脱液，跑分离胶5cm（不含浓缩胶的SDS－PAGE），切下5cm胶条，放入1.5ml离心管中。

• 蛋白洗脱液，跑SDS－PAGE标准的胶，切下目标条带即可，放入1.5ml离心管中。