一个标准的ELISA试剂盒通常包含以下组件:
1、预包被微孔板:96孔或48孔塑料板,孔内已预先包被好捕获抗体或抗原(根据类型而定)。这是反应发生的场所。
2、酶标二抗(或酶标检测抗体/抗原):根据ELISA类型,提供辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗(用于间接法或夹心法),或酶标抗原(用于竞争法)。
3、标准品:已知精确浓度的抗原(或抗体)系列梯度溶液。用于绘制标准曲线,计算样本中待测物的浓度。
4、检测抗体(仅夹心法):未标记的、针对抗原另一表位的抗体。
5、样品稀释液:用于稀释样本,使其基质与标准品和缓冲体系匹配,减少非特异性干扰。
6、洗涤缓冲液:通常为含吐温-20的磷酸盐缓冲液。用于在各步骤之间洗去未结合的物质,减少背景干扰。洗涤是否是实验成败的关键!
7、封闭液:常用牛血清白蛋白或脱脂奶粉溶液。用于在包被后封闭微孔板上未结合的位点,防止后续步骤中的非特异性吸附,降低背景。
8、底物溶液:
对于HRP:常用四甲基联苯胺或3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
对于AP:常用对硝基苯磷酸酯。
9、终止液:
对于HRP-TMB:常用稀硫酸溶液。
对于AP-pNPP:常用氢氧化钠溶液。用于终止酶促反应,稳定最终颜色。
10、板封膜:在孵育步骤中覆盖微孔板,防止蒸发和污染。
11、说明书:详细的操作步骤、试剂保存条件、注意事项、预期结果和标准曲线绘制方法等。