全自动多肽合成仪基于固相多肽合成法（SPPS），通过自动化控制实现多肽链的逐步构建，其操作流程涵盖设备准备、合成执行、产物处理及结果分析四大阶段，具体如下：
一、设备准备与校准
1.安装调试
由专业技术人员完成设备安装，确保溶剂储液瓶、气体管道连接紧密，仪器各部件完好无损。
2.压力检查
打开电源及压缩空气开关，确认压力范围：
空气压力（AIR）：60-100 psi
氮气压力（N₂）：5-10 psi
3.系统校准
根据制造商说明书，对泵、阀、检测器等系统进行校准，包括：
温度控制测试
反应器混合搅拌效率验证
氨基酸推瓶与取液针精度校准
UV检测器波长准确性验证
4.反应容器选择
根据合成规模（如毫克级至克级）选择合适容器，确保材料（如聚苯乙烯或聚酰亚胺）不与反应物或溶剂发生反应。
二、合成前材料准备
1.试剂配制
氨基酸：按合成方案称量，确保新鲜纯净，避免杂质引入。
活化试剂：如HBTU、DCC等，按比例与氨基酸混合。
溶剂：DMF（N,N-二甲基甲酰胺）、DCM（二氯甲烷）等，用于溶解试剂和洗涤。
2.树脂处理
将树脂加入固相合成仪，用DCM溶胀后抽干。
用DMF洗涤树脂，去除杂质，洗涤结束后抽干备用。
3.参数设定
根据多肽序列和长度设定反应条件，包括：
温度：脱保护、偶联等步骤的精确控温（如室温至50℃）。
时间：每步反应持续时间（如脱保护5-15分钟，偶联15-30分钟）。
压力：控制气体压力以优化反应效率。
三、自动化合成执行
1.脱保护（Deprotection）
使用试剂去除前一个氨基酸的保护基团（如Fmoc基团）。
洗涤：用DCM、甲醇等溶剂洗涤，去除残留试剂。
2.偶联（Coupling）
活化：将新氨基酸与活化试剂（如HBTU/DIPEA）混合，形成活性中间体。
反应：将活化后的氨基酸溶液投入反应柱，补充DMF至适当浓度，搅拌进行缩合反应，形成肽键。
3.洗涤与纯化
每步反应后，用DMF洗涤反应柱，清除未反应物质和副产物。
重复脱保护和偶联步骤，直至多肽链达到预定长度。
4.实时监控
通过UV检测、质谱分析等方法监控反应进程，确保每一步按预期进行。
调整参数：根据监控结果自动优化反应时间、温度等条件。
四、产物切割与纯化
1.切割（Cleavage）
配置裂解液（如TFA强酸溶液），提前冷藏保存。
将肽树脂加入反应釜，加入预冷裂解液，搅拌反应以将多肽从树脂上裂解下来。
2.后处理
裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂，并用TFA洗涤。
浓缩：将裂解液转入旋转蒸发仪，室温浓缩至小体积。
3.沉淀与收集
使用沉淀剂（如甲基叔丁基醚）使多肽析出，通过离心、洗涤得到粗肽。
4.高效纯化
采用HPLC（高效液相色谱）等方法纯化粗肽，去除杂质并分离目标多肽。
冻干处理：将纯化后的多肽溶液旋蒸除去有机溶剂，置于冻干机中设定升温程序进行冻干。
五、结果分析与记录
1.质谱分析：使用质谱仪确认合成物的分子量和氨基酸序列，验证合成成功性。
2.核磁分析（可选）：对多肽进行进一步结构分析，提供原子间连接方式和空间构型信息。
3.实验记录：详细记录每一步操作参数和结果，包括试剂使用量、反应时间、温度、压力等。
4.报告生成：总结合成过程中的关键数据和产物纯度信息，生成实验报告，为后续研究提供参考。
