多克隆抗体制备是一个涉及多个步骤和精细操作的过程，其目的是通过免疫动物(通常是兔子或小鼠)来生成能够识别特定抗原的多种抗体混合物。
一、抗原准备
1.抗原的选择与处理：抗原是能引起机体免疫反应的物质，具有抗原性和免疫原性。抗原通常需要经过纯化，以确保其纯度和特异性。对于半抗原，需要偶联到大分子载体蛋白上，如BSA、OVA或HSA，以增强其免疫原性。
2.抗原的乳化：将抗原与佐剂按一定比例混合，并通过剧烈振荡使其充分乳化。乳化过程至关重要，因为未乳化的抗原会影响免疫效果。
二、免疫动物
1.动物选择：常用的免疫动物包括新西兰大白兔、日本大耳白兔等。选择健康、体重适中的动物，并确保它们在免疫前已适应新环境。
2.免疫方案：根据抗原的性质和所需抗体的量，制定合适的免疫方案。通常采用皮下或皮内多点注射法，每隔一定时间(如2-4周)进行一次免疫，共免疫数次(如4-5次)。
3.血清收集：在每次免疫后的一段时间内(如7-10天)，通过心脏采血或颈动脉放血等方式收集血液。收集的血液需置于37℃烘箱中凝固，然后转入4℃过夜，通过离心分离出血清。
三、多克隆抗体的检测与纯化
1.效价检测：通过ELISA、WesternBlot等方法检测抗血清的效价和特异性。效价达到一定水平后，即可进行抗体的纯化。
